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本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

ELISA檢測試劑盒試驗原理：

BMP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知BMP濃度的標(biāo)準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將BMP和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中BMP的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

ELISA檢測試劑盒操作注意事項

1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準品應(yīng)丟棄，不可保存。

2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

標(biāo)準品：標(biāo)準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準品振蕩混勻。

1． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3． 加入稀釋好后的標(biāo)準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標(biāo)準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

ELISA檢測試劑盒結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的BMP標(biāo)準品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的BMP含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml

間硝基苯甲醛 3-Nitrobenzaldehyde X83618 BR，50%，分子量60-100萬，液體 1克
對硝基苯甲醛 4-Nitrobenzaldehyde X83619 BR，50%，分子量70000，液體 25克
2-苯基乙醛 Phenylacetaldehyde X83620 BR,50%，分子量6-75萬，液體 100克
鄰苯二醛 OPA X83621 BR,50%，分子量1800-2000，液體 25克
對酞醛 p-Phthalaldehyde X83622 BR,50%，分子量1200-1300，液體 100克
甲基乙二醛 Methylglyoxal X83623 超純，99% 500克
正十一醛 Undecanal X83624 AR，99.5% 100克
焦兒茶醛二甲醚 3,4-二甲氧基苯甲醛3,4-Dimethoxybenzaldehyde X83625 AR，99.5% 500克
香草醛 Vanillin X83626 AR，99% 25克
二水合鉬酸鈉 Sodium molybdate dihydrate X83627 AR，99.5% 100克
酚酞二磷酸四鈉鹽 Phenolphthalein bisphosphate tetrasodium salt X83628 AR，99% 100毫克
無水磷酸肌酸鈉鹽 Creatine phosphate sodium salt X83629 AR，98.5% 500毫克
四水磷酸肌酸鈉鹽 Sodium creatine phosphate dibasic tetrahydrate X83630 CP，99% 100克
去氧膽酸鈉 Deoxycholic acid sodium salt X83631 AR，98.5% 1公斤
豬膽酸鈉 Cholic aicd sodium Salt X83632 CP，98% 100克
牛膽酸鈉 Sodium taurocholate hydrate X83633 CP 1公斤
2，6-二氯吲哚酚 DCIP X83634 CP，98.5% 100克
正丁酸鈉 Sodium butyrate X83635 CP，98% 1公斤
肌醇六磷酸鈉 Phytic acid sodium salt hydrate X83636 特純，98% 100克
水合植酸十二鈉 Phytic acid dodecasodium salt hydrate X83637 CP，98% 1公斤
焦葡萄酸鈉 Sodium pyruvate X83638 特純，99% 50克
碳酸鈉 Sodium carbonate anhydrous X83639 AR，99% 50毫克
重碳酸鈉 Sodium hydrogen carboante X83640 光譜級，99.8% 100毫克
磷酸一鈉單水合物 Sodium dihydrogen phosphate monohydrate X83641 CP，98% 5克
磷酸一鈉二水物 Sodium phosphate monobasic dihydrate X83642 CP，99% 25克
磷酸一鈉 MSP X83643 AR，98% 5克
磷酸二鈉 Sodium phosphate dibasic dodecahydrate X83644 AR，99% 25克
七水合磷酸二鈉 SSodium phosphate dibasic heptahydrate X83645 CP 100克
無水磷酸二鈉 Sodium phosphate dibasic X83646 特純，97% 500克
正磷酸鈉 TSP X83647 特純，98% 100克
三堿式磷酸鈉 Trisodium phosphate X83648 BR，98% 25克
4,4-二羧基-2,2-聯(lián)喹啉二鈉 BCA X83649 CP，99% 25克
酒石酸鈉 D-（+）-Tartaric acid disodium salt X83650 BR，98% 20毫克
L-酒石酸鈉 L-（+）-Tartaric acid disodium salt X83651 BR，98% 100毫克
二水偏釩酸鈉 Sodium metavanadate dihydrate X83652 CP，99% 1克
釩酸鈉 Sodium metavanadate X83653 CP，98% 100毫克
四苯基硼酸鈉 NaTBP X83654 CP，95% 1毫升
氟化鈉 Sodium fluoride X83655 CP，98.5% 25克
苛性鈉 Sodium hydroxide X83656 AR，99.8% 100克
乙二酸鈉 Sodium oxalate X83657 工藝級，90% 500克
一硫化鈉 Sodium sulfide X83658 CP，98% 5克
偏鋁酸鈉 Sodium aluminate X83659 工藝級 250毫克
偏銻酸鈉 Sodium antimonate X83660 CP，98.5% 100毫升
二水鉍酸鈉 Sodium bismuthate X83661 BR，99% 1克