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上海通蔚ELISA試劑盒怎樣正確的復蘇細胞
更新時間:2017-11-29   點擊次數:1691次

怎樣正確的復蘇細胞
細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態檢查的作用何在?不羅嗦了,請看下文:
活力檢查 – 千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發現有污染毫不猶豫的丟棄!形態檢查 – 檢查細胞的固有形態和生長行為。

凍存細胞:
補充新的培養液 – 在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養液。
在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數活細胞數,用凍存液調整細胞密度 ~5 x106 cells/ml (根據不同的細胞類型調整)
凍存液 – 用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據細胞類型選擇zui合適的凍存液(常用的凍存液成分有):
– 5-10% DMSO – 注意確保DMSO不含有其他的毒性物質。
– 5-15% 甘油
– 如果細胞在無血清培養基內生長,應在50%條件培養基內(細胞在無血清培養基內生長24小時)內凍存和復蘇。
在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。
程序降溫是保證凍存細胞活性的關鍵,使用 Mr. Frosty(找生物注一種裝置)保證降溫速度為1°-3°C,置于-80°C冰箱內過夜,如果沒有Mr. Frosty裝置,可以使用實驗室常見的泡沫盒、棉花等
放入液氮罐之前記錄凍存管的數量和位置。以zui快的速度轉移凍存管知液氮罐內,因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!

細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節,不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。

 

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