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     小鼠 (Mouse) 雌激素 (Estrogen) ELISA 檢測試劑盒說明書
更新時間:2012-07-05   點擊次數:1985次

小鼠 (Mouse) 雌激素 (Estrogen) ELISA 檢測試劑盒

          本試劑僅供研究使用      標本:血清或血漿

試驗原理:
    Estrogen試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Estrogen濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Estrogen和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Estrogen的濃度呈比例關系。
    
試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:80ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標記的抗Estrogen抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

小鼠 (Mouse) 雌激素 (Estrogen) ELISA 檢測試劑盒
 

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

小鼠 (Mouse) 雌激素 (Estrogen) ELISA 檢測試劑盒
 

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
80 ng/ml (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
40 ng/ml (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
20 ng/ml (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 ng/ml (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 ng/ml (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 ng/ml (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。


操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

小鼠 (Mouse) 雌激素 (Estrogen) ELISA 檢測試劑盒
 

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Estrogen標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Estrogen含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-80ng/ml

4、敏感度: 0.1 ng/ml
Auramine O 金胺O [2465-27-2] 25g
Auramine O 金胺O [2465-27-2] 100g
Avidin 親和素 [1405-69-2] 5mg
Azocarmine G 偶氮胭脂紅G [25641-18-3] 25g
Azomethine-H monosodium salt 甲亞胺鹽 [206752-32-1] 1g
Azithromycin 阿奇霉素 [83905-01-5] 10g
Azobenzene 偶氮苯 [103-33-3] 250g
Azure II eosinate 天青II-曙紅 [53092-85-6] 25g
Azure A chloride salt 天青A [531-53-3] 25g
Bacitracin zinc 桿菌肽鋅 > 70U/mg [1405-89-6] 5g
Bacitracin zinc 桿菌肽鋅 > 70U/mg [1405-89-6] 25g
Bacitracin zinc 桿菌肽鋅 > 70U/mg [1405-89-6] 500KU
Bafilomycin A1, from Streptomyces griseus 巴佛洛霉素A1 [88899-55-2] 25ug
Bambuterol hydrochloride 鹽酸班布特羅 [81732-46-9] 100g
Barbitol 巴比妥 [57-44-3] 25g
Barium acetate 乙酸鋇 [543-80-6] 250g
Barium carbonate 碳酸鋇 [513-77-9] 500g
Barium chloride, dihydrate 氯化鋇二水 [10326-27-9] 500g
Barium chlorate, monohydrate 氯酸鋇一水 [10294-38-9] 500g
Fast red TR salt 固紅TR / 1g
Ferulic acid 松柏酸 [537-98-4] 10g
Barium chromate 鉻酸鋇 [10294-40-3] 500g
 

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